*液相色譜方法-*通恒(在線咨詢)-河北*液相色譜
視頻作者:北京*通恒科技有限公司
hplc概述
*液相色譜法(hplc)是上個世紀七十年代迅速發展起來的一項*、快速的分析分離技術,河北*液相色譜,是現代分離測試的重要手段。
色譜法的分離原理是:溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時,由于與固定相(station phase)發生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
hplc是在經典的液相色譜法基礎上發展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒*細的*固定相的柱色譜分離技術。其分離機制與常規柱色譜相同,但填料更加精細,*液相色譜哪家便宜,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程,其組成、比例和ph值可靈活調節,分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調節樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
*液相色譜法的應用范圍十分廣泛,*液相色譜價格,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、*性、離子型化合物和大分子物質均可用*液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用*液相色譜來分析。
*液相色譜儀-色譜柱的使用和*
色譜柱是*液相色譜儀主要的部件,被測物質能否被很好的分離和測定,色譜柱的性能起著決定性的作用。因此,在日常工作中,應特別注意色譜柱的正確使用和維修*,以延長色譜柱的使用壽命。
1、使用預柱和保護柱。
預柱(pre-column)安裝于泵和進樣器之間,它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡,并防止了對柱填料有*作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進入色譜柱,保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換,而不需要經常更換色譜柱,這就延長了色譜柱的使用壽命。
2、防止氣體進入色譜柱。
有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的,否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此,為了防止氣泡進入色譜柱,一定要使用經過脫氣的流動相,并且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲,觀察是否有溶劑滲出;b.如有溶劑滲出,即可將色譜柱接到管路上,以避免氣泡的進入;c.如無溶劑滲出時,表明色譜柱的此端已經進去空氣了,此時,可將色譜柱的出口端接到進樣閥上,以流動相來反方向沖洗色譜柱,以便將柱內的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱,如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低;d.如果流出的溶劑里不含有氣泡,說明柱內的氣體已經被排出了,再將色譜柱以正確的方向接好,這樣氣泡就進不到色譜柱里面了。
3、色譜柱的清洗。
為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應及時地清洗色譜柱。
4、色譜柱的存放。
*液相色譜的歷史
1903年俄國植物化學家茨維特(tswett)初次提出“色譜法”(chromatography)和“色譜圖”(chromatogram)的概念。茨維特使用色譜法 chromatography (來自希臘字, chroma 意思是顏色, graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄)來描述他的彩色試驗。(令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。)1930年以后,相繼出現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。1952年,英國學者martin和synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作,提出了關于氣-液分配色譜的比較完整的理論和方法,把色譜技術向前推進了一大步,這是氣相色譜在此后的十多年間發展十分迅速的原因。1958年,*液相色譜方法,基于moore和stein的工作,離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現,這是近代液相色譜的一個重要嘗試,但分離效率尚不理想。1960年中后期,氣相色譜理論和實踐發展,以及機械、光學、電子等技術上的進步,液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了hplc。1970年中期以后,微處理機技術用于液相色譜,進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后,生物工程和生命科學在國際和國內的迅速發展,為*液相色譜技術提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題,如人類*組計劃,蛋白質組學有hplc作預分離等。
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