友名生物技術(shù)-堿性*酶

所有合成cdna條鏈的方法都要用依賴于rna的dna聚合酶(反轉(zhuǎn)錄酶)來催化反應(yīng)，主要有兩個(gè)關(guān)鍵因素，一個(gè)是mrna模板，另一個(gè)是反轉(zhuǎn)錄酶 。商品化反轉(zhuǎn)錄酶有從禽類成髓細(xì)胞瘤病毒純化到的禽類成髓細(xì)胞病毒（amv）逆轉(zhuǎn)錄酶和從表達(dá)化的moloney鼠病毒反轉(zhuǎn)錄酶*的大腸中分離到的鼠病毒（mlv）反轉(zhuǎn)錄酶。amv反轉(zhuǎn)錄酶包括2個(gè)具有若干種酶活性的多肽亞基，這些活性包括依賴于rna的dna合成，依賴于dna的dna合成以及對dna-rna雜交體的rna部分進(jìn)行內(nèi)切降解（rna酶h活性）。mlv反轉(zhuǎn)錄酶只有單個(gè)多肽亞基，兼?zhèn)湟蕾囉趓na和依賴于dna的dna合成活性，但降解dna—rna雜交體中的rna的能力較弱。且其熱穩(wěn)定性較amv反轉(zhuǎn)錄酶差。mlv反轉(zhuǎn)錄酶能合成較長的edna（如大于2～3kb）。amv反轉(zhuǎn)錄酶和mi。v反轉(zhuǎn)錄酶利用rna模板合成cdna時(shí)的適ph、適鹽濃度和適溫度各不相同．所以合成鏈時(shí)相應(yīng)調(diào)整條件是非常重要的。
t4 rna ligase主要用于rna和rna之間的連接，連接時(shí)需要5*基團(tuán)和3羥基的存在。不僅可以進(jìn)行rna分子間的連接，也可以進(jìn)行rna分子(*短8個(gè)堿基)的環(huán)化連接。
t4 rna ligase可以用于rna和單核苷酸之間的連接，堿性*酶，單核苷酸必須為5和3均*化的形式，此時(shí)常用于rna的3末端標(biāo)記。
t4 rna ligase也可以用于dna和rna之間的連接。當(dāng)dna提供5*基團(tuán)，rna提供3羥基時(shí)，連接效率較高；當(dāng)dna提供3羥基，rna提供5*基團(tuán)時(shí)，連接效率非常低。
t4 rna ligase也可以用于dna和dna之間的連接，但連接效率非常低。主要用于dna的環(huán)化連接，例如5 race中的cdna環(huán)化。dna和dna之間的連接盡管可以進(jìn)行，但比較困難。
堿性*酶
*在懷孕，以及骨骼成長中遭受某種類型損傷后會(huì)將堿性*酶釋放進(jìn)血流。堿性*酶是一種由肝1臟產(chǎn)生的蛋白質(zhì)并可以在所有*器1官中發(fā)現(xiàn)它。在兒童和青少年的骨骼成長過程中，骨頭中的*酶數(shù)量相對較高。醫(yī)生能通過血檢了解堿性*酶，如果水平過高就說明存在一些健康問題。然而，堿性*酶只是幫助醫(yī)生找出潛在原因的其中一個(gè)指數(shù)。
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